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AB Qtrap 5500在蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析中的新技術(shù)及其新應(yīng)用
發(fā)表時(shí)間:2023/11/22 10:06:18  |  點(diǎn)擊率:1144

高效實(shí)現(xiàn)強(qiáng)大的MRM3定量方法

AB Sciex公司推出的Qtrap 5500系統(tǒng)具備高的靈敏度、好的阱內(nèi)裂解效率、快的掃描速度以及更快的MRM3掃描方式。在分析生物樣品時(shí),樣品一般都較為復(fù)雜,所以在某些特殊的情況下,分析人員需要選擇性更高的檢測(cè)技術(shù),MRM3技術(shù)便能夠幫助分析人員解決上述問(wèn)題。

所謂MRM3掃描方式就是通過(guò)Qtrap 5500質(zhì)譜系統(tǒng)與液相色譜相配合,在Q1選擇一個(gè)前體離子,在Q2中將該離子進(jìn)行碎裂,與MRM掃描方式不同在于MRM3掃描方式是將所有的碎片離子聚集在線性加速離子阱中,之后,在離子阱中以高達(dá)10K20KDa/Sec的速度掃描特定的二代碎片離子,從而獲得MRM3譜圖。

(1)MRM掃描背景噪音較高,或譜圖中有干擾峰存在;(2)通過(guò)更換流動(dòng)相、優(yōu)化液相色譜條件、選擇不同的MRM離子對(duì)、選擇不同的離子化方式等這些簡(jiǎn)單方法無(wú)法消除背景噪音;(3)與背景噪音相比,沒(méi)有特定的MRM子離子可用,在遇到上述這些干擾和困難時(shí),MRM3就是一種有效的定量策略。

脂質(zhì)分析

脂類物質(zhì)是細(xì)胞膜的重要組成成分,在細(xì)胞功能上扮演著重要的角色,所有的脂類都有一個(gè)極性頭部和熟睡的尾巴,或至少是代謝后生成此類分子。作為細(xì)胞能量?jī)?chǔ)存,并且參與細(xì)胞間的信息交換。了解脂類代謝途徑有益于設(shè)計(jì)高效且副作用小的藥物,對(duì)于生物體生理過(guò)程和藥物設(shè)計(jì)有著重要的意義。譬如阿司匹林、布洛芬與脂類代謝相關(guān),降低膽固醇的他汀藥物,也能戲劇性的改變脂類代謝。

傳統(tǒng)研究脂類物質(zhì)的技術(shù)方法包括有:薄層層析、氣相色譜以及氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)。氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)通常分析經(jīng)分離純化的脂類衍生物,但衍生化方法通常易導(dǎo)致脂類發(fā)生變化,破壞了脂類分子的完整性。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以解決上述問(wèn)題,幫助分析人員鑒定脂類、了解脂類類別、獲得脂類的表達(dá)譜、比較脂類表達(dá)譜、獲得結(jié)構(gòu)信息、測(cè)定分子量以及代謝物定量。LC/MS/MS不同于GC/MS,它可使研究人員能夠觀察到完整的脂類分子,直觀地看到何種脂肪酸連接在頭部基團(tuán)上。

多重全體離子掃描方式(MPIS)

多重全體離子掃描方式具體指指固定在Q3掃描某個(gè)碎片離子,通過(guò)分析檢測(cè)出哪個(gè)前體離子會(huì)產(chǎn)生出該碎片離子,并將該離子的信號(hào)記錄下來(lái)。通過(guò)這樣反復(fù)不斷地掃描,便可以推導(dǎo)出哪些前提離子將會(huì)產(chǎn)生某一個(gè)碎片離子。該方法的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在可對(duì)所有感興趣的脂類分子和內(nèi)標(biāo)分子進(jìn)行平行檢測(cè),圖譜了直觀解析并可以疊加用于復(fù)雜脂類的定性分析,可方便的從前提離子掃描切換到MRM掃描,用于脂類分子的定量分析。

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